感染的诊断要依据病史、临床表现和实验室检查结果而定。有不洁性交史,而且在生殖器部位出现皮肤红斑和原发性水疱,易复发等不难诊断。必要时可作疱液涂片,培养、接种、免疫荧光检查。血清免疫抗体测定等,均有助于诊断和确定病毒类型。
一、细胞学方法
对皮损刮片做Wright-Gemsa(Tzanck试验)或Papanicolaou染色,可检出HSV感染特征的巨细胞包函体,但不能区别HSV感染或水痘带状疱疹病毒感染,敏感性仅为病毒分离的60%。
二、培养法
从水疱底部取材做组织培养分离病毒,为目前较敏感、最特异的检查方法,需天,因其技术条件要求高,价格昂贵,不能普遍使用。
三、抗体检测
目前最广泛的是HSV-2抗体检测,如蛋白印迹法也可用gD2作抗原检测HSV-2抗体,具有敏感性,且能区分HSV-1和HSV-2的优点。
四、基因诊断
(一)用PCR分型检测单纯疱疹病毒
PCR是一种敏感性高,特异性强的快速检测方法,标本中含有1fgHSV-DNA就可以检出,其在HSV感染的诊断研究中发展较快,且分型检测HSV是发展的趋势。
1、标本采集和处理
(1)标本采集
①脑脊液:直接无菌采取患者0.5ml脑脊液标本于无菌试管送检。如肉眼可见血色,应离心取上清。
②羊水及婴儿血清:同上,应避免溶血
③脑组织:脑组织尸检、活检标本,加1mlPBS标本缓冲液研磨后,待检。
④眼及皮肤病灶分泌物:用预测(半干)棉拭子直接取患处分泌物,置1mlPBS标本缓冲液中送检。
⑤生殖器(宫颈、阴道、外阴、阴茎)标本:先用消毒棉拭子擦去病变部位表面粘液、污垢,再用预潮棉拭子用力擦拭患处分泌物,置1mlPBS标本缓冲液中送检。
(2)标本处理
①预处理:所有液体标本均可直接进行模板制备;可以取100l标本液,离心5000r/min5min后,去上清,取沉淀物进行模板制备。
②模板制备:a:蛋白酶K消化裂解法:沉淀物加100l蛋白酶K消化裂解液,55℃1h后,煮沸10min,离心5000r/min5min,收集上清。b:水煮法:沉淀物加100l蒸馏水,摇均水煮20min,离心5000r/min5min收集上清。c:1%TritonX-100裂解法:取采集的标本液100l,加入1lTritonX-100,水煮20min,5000r/min5min,收集上清。d:5%NP-40裂解法:取采集的标本液100l,加5lNP-40,水煮20min,5000r/min5min收集上清。e:如标本溶血严重经上述裂解处理后,再加等体积酚-氯仿抽提、冷乙醇沉淀DNA,加10lDW溶解待检。
(实习:陈静恩)
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